水質糞大腸菌群檢驗紙片

                  BD105Ⅰ水質糞大腸菌群檢驗紙片

BD105Ⅰ  水質（糞）大腸菌群快速檢驗紙片  1份/包  適用於(yu) 湖水、水源水中大腸菌群的快速檢測。

BD105Ⅱ  水質（糞）大腸菌群快速檢驗紙片  1份/包  適用於(yu) 河水、生活用水、醫療機構處理後排汙水、禽畜養(yang) 殖業(ye) 等排放廢水中大腸菌群的快速檢測。

分BD105Ⅰ和BD105Ⅱ兩(liang) 個(ge) 型號，請注意選擇型號。

1、適用範圍 水質（糞）大腸菌群的測定 紙片快速法

本標準適用於(yu) 地表水、生活汙水、醫療機構及禽畜養(yang) 殖業(ye) 等其他行業(ye) 排放的廢水中（糞）大腸菌群的快速篩查。

本方法的檢出限為(wei) 20MPN/L。

2、規範性引用文件

本標準內(nei) 容引用了下列文件或其中的條款。凡是不注明日期的引用文件，其有效版本適用於(yu) 本標準。HJ/T91地表水和汙水監測技術規範

3、術語和定義(yi)

下列術語和定義(yi) 適用於(yu) 本標準。

3.1總大腸菌群（total coliforms）

在37℃培養(yang) ，24h內(nei) 能發酵乳糖酸產(chan) 氣的需氧及兼性厭氧的革蘭(lan) 氏陰性無芽胞杆菌。

3.2 糞大腸菌群（fecal coliforms）

44.5℃培養(yang) ，24h內(nei) 能發酵乳糖產(chan) 酸氣的總大腸菌群，屬糞行來源，稱為(wei) 糞大腸菌群。

4、方法原理

將一定量的乳糖、指示劑（溴甲酚紫和2，3, 5-氯化三苯基四氮唑即TTC）以及營養(yang) 成分等吸附於(yu) 一定麵積的無菌濾紙上，當細菌生長繁殖時，產(chan) 酸使PH值降低，溴甲酚紫指示劑由紫色變黃色。同時，產(chan) 氣過程相應的脫氫酶在適宜的PH範圍內(nei) ，催化底物脫氫還原TTC形成紅色的不溶性三苯甲臢（TTF），即可在產(chan) 酸後的黃色背景下顯示出紅色斑點（或紅暈）。通過上述指示劑的顏色變化就可對是否產(chan) 酸產(chan) 氣作出判斷，從(cong) 而確定是否有（糞）大腸菌群存在，再通過查MPN表就可得出相應（糞）大腸菌群的濃度值。

5、試劑和材料

除非另有說明，分析時均使用符合國家標準的分析純化學試劑。

5.1市售水質總大腸菌群、糞大腸菌群測試片：10ml水樣量紙片按附錄A的方法進行質量鑒定，達到要求後方可使用。

5.2無菌水

用新製備的去離子水或蒸餾水，按無菌操作要求，121℃高壓蒸汽滅菌20min，備用。

5.3溶液：ρ(Na2S2O3)=0.10g/ml

稱取10g，溶於(yu) 適量蒸餾水（或去離子）中，稀釋至100ml，現配。

5.4乙二胺四乙酸二鈉（EDTA- Na2）溶液：ρ(C10H14N2O8Na2。 2H2O)=0.15g/ml

稱取EDTA-Na2 15g,溶於(yu) 適量蒸餾水（或去離子水）中，稀釋至100ml，此溶液保質期為(wei) 30d。

6、儀(yi) 器和設備

6.1 恒溫培養(yang) 箱：37℃±1℃。

6.2 恒溫培養(yang) 箱：44℃±0.5℃。

6.3 高壓蒸汽滅菌器：121℃、101.3kpa。

6.4 冰箱：0-4℃

6.5 移液管：1±0.01ml、10±0.1ml。

6.6 試管：φ15mm×150mm.

6.7 采樣瓶：500ml。

注1：移液器、試管、采樣瓶等玻璃器皿實驗前要按無菌操作要求包紮，121℃高壓蒸汽滅菌20min，烘幹，備用。

7、樣品

用滅菌器具，按照HJ/T 91的規定及無菌操作的要求，采集水樣400ml放入已滅菌的采樣瓶中。如果是經加氯處理的廢水，需在采樣瓶滅菌前加入乙二胺四乙酸二鈉（EDTA- Na2）溶液（5.4）1.2ml，以消除幹擾。酸性樣品，需調節胖胖的PH值至7.0-8.0。

采樣後2h內(nei) 檢測，否則，需10℃以下冷藏並6h內(nei) 送檢，實驗室接樣後，應將樣品放入0-4℃冰箱並2h內(nei) 測定。

注2:10mg可保證去除水樣中1.5mg餘(yu) 氯，用量克根據水樣實際餘(yu) 氯量調整。

8、分析步驟

8.1接種量

每個(ge) 樣品按三個(ge) 不同的接種量接種，每個(ge) 接種量分別接種5張紙片，共接種15張紙片。

根據水樣的汙染程度確定接種量，應盡可能使5個(ge) 接種量大的紙片為(wei) 陽性、5個(ge) 接種量小的紙片為(wei) 陰性。

清潔水樣的參考接種量分別為(wei) 10 ml、1 ml、0.1 ml，受汙染水樣參考接種量根據汙染程度可接種1 ml、0.1ml、0.01 ml或0.1 ml、0.01 ml、0.001 ml等。

接種量小於(yu) 1ml時，水樣應製成稀釋樣品後使用。接種量為(wei) 0.1ml、0.01 ml時，分別製成1:10稀釋樣品、1:100稀釋樣品。其它接種量的稀釋樣品依次類推。

1:10稀釋樣品的製作方法為(wei) ：吸取1ml水樣，注入盛有9 ml無菌水的試管中，混勻，製成1:10稀釋樣品。其它稀釋度的稀釋樣品同法製作。

8.2接種、培養(yang)

水樣充分混勻，按無菌操作製作稀釋水樣及接種水樣。

清潔水樣，接種水樣總量為(wei) 55.5ml，10 ml水樣量紙片5張，每張接種水樣10ml，1 ml水樣量紙片10張，其中5張各接種水樣1ml，另5張各接種1:10的稀釋水樣1ml。受汙染水樣，接種3個(ge) 不同稀釋度的1ml稀釋水樣各5張。

接種水樣應均勻塗布於(yu) 紙片上，紙片充分侵潤、吸收水樣，用手輕輕壓平，做好標記。

測總大腸菌群時，在37±1℃的條件下培養(yang) 18-24h後觀察結果；測糞大腸菌群時，在44.5±0.5℃的條件下培養(yang) 18-24h後觀察結果。

注3：

1、檢測糞大腸菌群時，紙片接種後應立即放置於(yu) 44.5±0.5℃的恒溫培養(yang) 箱中培養(yang) ，在常溫下放置過久將影響檢測結果的準確性。

2、紙片加入水樣後，短時間內(nei) 變黃或退色，表明水樣存在酸性物質活氧化劑幹擾，需按“7樣品”一節方法去除相應幹擾。

9、結果判定

（1）紙片上出現紅斑或紅暈且周圍變黃，為(wei) 陽性。

（2）紙片全片變黃，無紅斑或紅暈，為(wei) 陽性。

（3）紙片部分變黃，無紅斑或紅暈，為(wei) 陰性。

（4）紙片的紫色背景上出現紅斑或紅暈，而周圍不變黃，為(wei) 陰性。

（5）紙片無變化，為(wei) 陰性。